ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ПРОЦЕССА ПРОРАСТАНИЯ НА ЗАПАСНЫЕ БЕЛКИ (SDS-PAGE) И СОХРАННОСТЬ ГЕНОМНОЙ ДНК TRITICUM AESTIVUM L.

Аннотация

В работе представлен комплексный сравнительный анализ деградации запасных белков клейковины и сохранности геномной ДНК в интактном и проросшем зерне пшеницы мягкой яровой (Triticum aestivum L.). Актуальность работы обусловлена тем, что прорастание зерна в поле вследствие нестабильных климатических условий, наблюдаемых в течение ряда последних лет, приводит к активации эндогенных гидролаз и существенному снижению качества зерна, однако влияние данного процесса на сохранность геномной ДНК изучено недостаточно. Для анализа белков применяли вертикальный SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях (non-reducing) на 10 % полиакриламидном геле с маркером 10–180 кДа; геномную ДНК выделяли с использованием набора HiPurA SuperPlant DNA Purification Kit (HiMedia, Индия) и анализировали электрофорезом в 1 % агарозном геле и спектрофотометрически (A260/A280). Установлено, что в проросших зернах пшеницы наблюдается значительная деградация высокомолекулярных глютенинов (HMW-GS, 100–130 кДа) и снижение интенсивности полос LMW-GS и γ-глиадинов (35–50 кДа) с накоплением низкомолекулярных продуктов протеолиза (< 15 кДа). Анализ геномной ДНК показал, что высокомолекулярные фрагменты сохраняют целостность во всех образцах, включая проросшие. Вместе с тем концентрация ДНК в проросших образцах (0,10 мг/мл) ниже, чем в интактных (0,11–0,13 мг/мл), а показатель чистоты A260/A280 = 1,65 свидетельствует о загрязнении белковыми примесями, требующем дополнительной очистки. Сделан вывод о том, что на ранних этапах прорастания активация протеаз опережает активацию нуклеаз, вследствие чего проросшее зерно пригодно для молекулярно-генетической идентификации и генотипирования сортов пшеницы.